細胞系鑒定的重要性
1.NIH、ATCC、Nature 和 Science 等近年對此多次發出呼吁,要求研究學者對細胞進行鑒定。短串聯重復序列 (Short tandem repeat, STR) 分析可以幫助研究人員確認細胞株的身份,以及它是否不受其他細胞株和微生物的污染。據統計,15-20% 的細胞培養存在交叉污染或錯誤識別,導致時間、金錢以及由于數據無效致使文章退稿。NIH 建議,所有細胞系在發表前都要經過認證;Nature 雜志要求,發布新的人類胚胎干細胞株的論文前需要提供 STR 鑒定報告。
2. 保證細胞一致性,可靠性:FDA 建議研究人員在培養細胞的較早階段(細胞培養第一周)鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應再一次 進行鑒定;對于生長活躍的細胞,應每兩個月鑒定一次;文獻發表前也應對細胞系身份進行鑒定。如果一個實驗室使用不止一種細胞系, 則應在實驗最開始時,就要對所有的細胞系進行鑒定,以便排除交叉污染的可能。
3. 為新建細胞系建立「身份證明」:2015 新版藥典中,規定新建細胞系/株、細胞庫(MCB、WCB)和生產的終末細胞均應進行鑒別實 驗,以確認為本細胞,且無其他細胞的交叉污染。(——《生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及鑒定規程》)
細胞系鑒定與 STR 的關系
STR(Short Tandem Repeat,短串聯重復序列)基因分型已被 CLAC、ATCC 等權威機構作為金標準應用于細胞鑒定。
STR 基因位點由長度為 3-7 個堿基對的短串連重復序列組成,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態性標記,被稱為細 胞的 DNA 指紋,其可通過 PCR(聚合酶式反應)來檢測,STR 基因位點上的等位基因可通過擴增區域內重復序列的拷貝數的不同來區分, 在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據所得的 STR 分型結果與專業的細胞 STR 數據庫比對從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系。
1.NIH、ATCC、Nature 和 Science 等近年對此多次發出呼吁,要求研究學者對細胞進行鑒定。短串聯重復序列 (Short tandem repeat, STR) 分析可以幫助研究人員確認細胞株的身份,以及它是否不受其他細胞株和微生物的污染。據統計,15-20% 的細胞培養存在交叉污染或錯誤識別,導致時間、金錢以及由于數據無效致使文章退稿。NIH 建議,所有細胞系在發表前都要經過認證;Nature 雜志要求,發布新的人類胚胎干細胞株的論文前需要提供 STR 鑒定報告。
2. 保證細胞一致性,可靠性:FDA 建議研究人員在培養細胞的較早階段(細胞培養第一周)鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應再一次 進行鑒定;對于生長活躍的細胞,應每兩個月鑒定一次;文獻發表前也應對細胞系身份進行鑒定。如果一個實驗室使用不止一種細胞系, 則應在實驗最開始時,就要對所有的細胞系進行鑒定,以便排除交叉污染的可能。
3. 為新建細胞系建立「身份證明」:2015 新版藥典中,規定新建細胞系/株、細胞庫(MCB、WCB)和生產的終末細胞均應進行鑒別實 驗,以確認為本細胞,且無其他細胞的交叉污染。(——《生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及鑒定規程》)
細胞系鑒定與 STR 的關系
STR(Short Tandem Repeat,短串聯重復序列)基因分型已被 CLAC、ATCC 等權威機構作為金標準應用于細胞鑒定。
STR 基因位點由長度為 3-7 個堿基對的短串連重復序列組成,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態性標記,被稱為細 胞的 DNA 指紋,其可通過 PCR(聚合酶式反應)來檢測,STR 基因位點上的等位基因可通過擴增區域內重復序列的拷貝數的不同來區分, 在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據所得的 STR 分型結果與專業的細胞 STR 數據庫比對從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系。


